做液相繞不過(guò)的關(guān)鍵點(diǎn)包括：

1. 流動(dòng)相應不改變填料的任何性質(zhì)。低交聯(lián)度的離子交換樹(shù)脂和排阻色譜填料有時(shí)遇到某些有機相會(huì )溶脹或收縮，從而改變色譜柱填床的性質(zhì)。堿性流動(dòng)相不能用于硅膠柱系統。酸性流動(dòng)相不能用于氧化鋁、氧化鎂等吸附劑的柱系統。

2. 純度。色譜柱的壽命與大量流動(dòng)相通過(guò)有關(guān)，特別是當溶劑所含雜質(zhì)在柱上積累時(shí)。

3. 必須與檢測器匹配。使用UV檢測器時(shí)，所用流動(dòng)相在檢測波長(cháng)下應沒(méi)有吸收，或吸收很小。當使用示差折光檢測器時(shí)，應選擇折光系數與樣品差別較大的溶劑作流動(dòng)相，以提高靈敏度。

4. 由強到弱：一般先用90%的乙腈（或甲醇）/水（或緩沖溶液）進(jìn)行試驗，這樣可以很快地得到分離結果，然后根據出峰情況調整有機溶劑（乙腈或甲醇）的比例。

5. 三倍規則：每減少10%的有機溶劑（甲醇或乙腈）的量，保留因子約增加3倍，此為三倍規則。這是一個(gè)聰明而又省力的辦法。調整的過(guò)程中，注意觀(guān)察各個(gè)峰的分離情況。

6. 粗調轉微調：當分離達到一定程度，應將有機溶劑10%的改變量調整為5%，并據此規則逐漸降低調整率，直至各組分的分離情況不再改變。

以上關(guān)鍵點(diǎn)在液相色譜分析中具有重要地位，為了獲得準確的分離結果，需要嚴格遵循這些關(guān)鍵點(diǎn)。